세포 기반 리포터 분석
세포 리포터 분석 장치는 신호 전달과 관련된 세포 사건을 모니터링하며, 적절한 프로모터의 영향을 받는 관심 유전자와 융합된 리포터 또는 마커 유전자로 구성되며, 이 프로모터는 결합 사건이나 신호 전달 계단 활성화에 대한 응답으로 발생한 전사 인자에 결합합니다 일산암요양병원.
전사 인자와 프로모터 영역의 결합은 기저 수준의 리포터 유전자 발현을 유발합니다. 리포터 유전자는 벡터를 통해 전달하기에 충분히 작아야 하며, 원하는 제품은 세포에 독성이 없고 면역원성이 없어야 하며, 역동적이고 신뢰할 수 있으며, 고유한 특성 및/또는 효소 활성을 가져야 하며, 다른 모든 세포 외 및 세포 내 단백질 풀과 쉽게 구별할 수 있어야 합니다. 리포터 유전자의 활성 및 자극은 적절한 프로모터와 최적의 조합에 따라 달라집니다. 오늘날 인기 있는 프로모터 선택은 관심 세포에 어떠한 기본 전사 인자도 결합하지 않는 것입니다. 일반적인 예로 효모 Gal4 시스템이 있는데, 이는 Gal4 전사 인자 DNA 결합 도메인을 조절 또는 결합 도메인에 결합하고, 리포터 유전자의 발현은 Gal4 반응 요소에 의해 제어됩니다.
최근 상업적으로 이용 가능한 리포터 유전자는 세포 내 및 세포 외 리포터 유전자로 분류됩니다. 루시퍼라제, 클로람페니콜 아세틸트랜스퍼라제(CAT), β-갈락토시다제, 에쿼린, 녹색 형광 단백질과 같은 세포 내 리포터 유전자 제품은 세포 시스템에서 발현되고 유지됩니다. 베타-갈락토시다제와 루시퍼라제 리포터는 모두 현재 고감도 비색 및 광도 검출 검정 목적으로 사용되고 있습니다.
세포외 리포터 유전자에는 분비 태반 알칼리성 인산가수분해효소(SPAP), β-락타마제가 포함되며, 이는 세포 배양 배지로 분비됩니다. 세포외 리포터 유전자 검정의 장점은 세포를 방해하지 않고 배양 배지에서 리포터 단백질 활동을 식별할 수 있는 기능 덕분에 독특합니다. 이를 통해 동일한 세포 집단을 사용하여 배양 배지를 반복적으로 실험하고 샘플링할 수 있습니다.
루시페라아제는 편리한 작용 모드와 세포 기반 분석 및 분자 생물학 분야에 광범위하게 적용할 수 있는 비용 효율성 때문에 오늘날 일반적으로 사용되는 리포터 시스템입니다. 루시페라아제는 여러 종의 박테리아와 반딧불이에서 발견되는 산화 효소를 발현하여 유기체가 “생물 발광”을 노출하거나 빛을 방출할 수 있도록 합니다. 이 중 가장 중요한 효소는 반딧불이 루시페라아제입니다. 반딧불이는 루시페라아제 효소에 의해 루시페린이 옥시루시페린으로 전환되는 화학 반응으로 인해 빛을 방출할 수 있습니다. 이 반응에 의해 일부 에너지가 빛의 형태로 방출됩니다.
Luciferase Reporter Cell Line 제품과 함께 사용하도록 특별히 제형화되고, 매우 민감하고, 지속적이며, 강렬한 신호를 생성하도록 설계된 Luciferase Assay Reagent의 도움으로. 1단계 글로우 검정 시약인 Luciferase Assay Reagent는 배양 상층액이나 세포 용해물을 다른 플레이트로 희석하거나 옮기지 않고도 사용 중인 루미노미터와 호환되는 세포 배양 플레이트에 직접 첨가할 수 있습니다.
이 세포 기반 기술은 특정 유전자 전달 및 발현을 평가하거나 프로모터 분석, 유전자 전달 및 유전자 발현의 영상화와 같은 포함된 단계를 별도로 평가하는 데 쉽게 사용할 수 있습니다. 이 시스템은 약물 발견 및 바이오시밀러 치료제의 초기 단계를 위해 선택된 표적 세포에서 다양한 생물학적 및 화학적 화합물과 소분자의 상대 투과성, 안정성, 효능 및 작용 기전의 스크리닝을 직접 추정하는 데 매우 편리합니다. 이러한 시스템은 생리적 조건을 모방할 수 있으며, 다양한 수용체-리간드 상호 작용, 알로스테릭 조절제, 세포 분열 및 증식의 신호 전달 경로, 세포 사멸, 2차 메신저 및 수용체 결합 검정과 같은 기존 방법에서는 이용할 수 없는 물질의 급성 세포 독성에 대한 중요한 개념을 제공하는 데 견고하고 유리합니다.
따라서 이러한 분석법은 전체 유기체와 생화학적 분석법 사이의 적절한 절충안을 나타내며, 화합물 활동의 생리학적으로 관련성 있는 기능적 결과를 생성하거나 살아있는 세포가 사용되기 때문에 신뢰할 수 있는 생물학적 중요성을 가질 수 있습니다. 이러한 특성으로 인해 리포터 시스템은 매우 짧은 기간 내에 적합한 표적을 찾기 위해 방대한 화학 물질/소분자 라이브러리를 스크리닝하는 데 가장 일반적으로 사용됩니다. 이 고성능 스크리닝 방법은 리드 검출 시간을 성공적으로 줄일 뿐만 아니라 초기 약물 발견 기간 동안 이상적인 약물 표적을 찾는 데 도움이 됩니다.